Серологический анализ крови (ИФА)

Серологические и иммунологические исследования

imageСерологические исследования — методы изучения взаимодействия антигенов с антителами в сыворотке крови. Серологическая диагностика базируется на определении специфических антител, которые образуются в процессе иммунного ответа, вызванного проникновением антигена — возбудителя заболевания. Серологические реакции (реакции «антиген-антитело») применяются для определения антигенов групп крови, в диагностике заболеваний, в судебной медицине для идентификации тканевых, микробных антигенов. Название «серология» — от латинских слов serum (сыворотка) и logos (знание) — учение о сыворотке крови и ее свойствах. Серологические реакции: реакции агглютинации реакции преципитации реакции нейтрализации реакции с участием комплемента реакции с использованием меченых антител или антигенов — реакция агглютинации хорошо выявляет lgM-антитела, но менее чувствительна для определения lgG-антител. — реакции связывания комплемента и гемолиза, которые требуют участия комплемента, не выявляют lgA-антитела и lgE-антитела.

imageИммунологические исследования позволяют идентифицировать вирусные, бактериальные, паразитарные заболевания, определять титры антител к ним, что позволяет оценивать устойчивость организма к отдельным видам инфекционных заболеваний и прогнозировать их развитие. Чувствительность И.м.и. превосходит все другие методы исследования антигенов и антител — с их помощью определяют группу и проверяют безопасность крови (гепатит В и ВИЧ-инфекция), при трансплантации тканей и органов определяется совместимость тканей.

Антиген — вещество, которое распознается организмом как чужеродное, и способное запускать иммунную (защитную) реакцию.

Это реакции, основанные на феномене агглютинации — склеивании носителей антигена с помощью иммунной сыворотки к этому антигену. Корпускулярные антигены (крупные частицы — микробные клетки, эритроциты, лейкоциты и т.д., склеиваются антителами и выпадают в осадок на дно пробирки в виде иммунных комплексов в форме хлопьев или зерен, видимых невооруженным глазом).

Реакции агглютинации для определения группы крови и резус-фактора основаны на взаимодействии аллоантител (изоантител) и антигенов эритроцитов. Для их обнаружения используют реакцию Кумбса, основанную на выявлении неполных антител с помощью антиглобулиновых сывороток.

К эритроцитам известной специфичности добавляют исследуемую сыворотку крови, антиглобулиновую сыворотку против lgG (непрямая реакция Кумбса). Fab-фрагменты неполных антител исследуемой сыворотки крови присоединяются к эритроцитам, а к свободным Fc-фрагментам этих антител присоединяются антитела против lgG, и происходит агглютинация эритроцитов.

Эритроциты, сенсибилизированные антителами. называют иммуноглобулиновыми эритроцитарными диагностикумами и применяют для выявления антигенов.

Реакцию пассивной гемагглютинации используют для диагностики заболеваний, вызванных бактериями (брюшной тиф и паратифы, дизентерия, бруцеллез, чума, холера и др.), простейшими (малярия) и вирусами (грипп, аденовирусные инфекции, вирусный гепатит В, корь, клещевой энцефалит, крымская геморрагическая лихорадка и др.), а также для определения некоторых гормонов, выявления повышенной чувствительности больного к лекарственным препаратам и гормонам, например пенициллину и инсулину.

Преципитация происходит в результате взаимодействия антител с растворимыми антигенами. Простейшим примером реакции преципитации является образование в пробирке непрозрачной полосы преципитации на границе наслоения антигена на антитело. Широко применяют различные разновидности реакции преципитации в полужидких гелях агара или агарозы (метод двойной иммунодиффузии по Оухтерлоню, метод радиальной иммунодиффузии, иммуноэлетрофорез), которые носят одновременно качественный и количественный характер.

В результате свободной диффузии в геле антигенов и антител в зоне оптимального их соотношения образуются специфические комплексы — полосы преципитации, которые выявляют визуально или при окрашивании. Особенностью метода является то, что каждая пара антиген — антитело формирует индивидуальную полосу преципитации, и реакция не зависит от наличия в исследуемой системе других антигенов и антител

Реакция связывания комплемента (РСК) основаны на способности субкомпонента комплемента Clq и затем других компонентов комплемента присоединяться к иммунным комплексам, позволяют титровать антигены или антитела по степени фиксации комплемента комплексом антиген — антитело. Эта реакция состоит из двух фаз: взаимодействия антигена с испытуемой сывороткой крови (исследуемая система) и взаимодействия гемолитической сыворотки с эритроцитами (индикаторная система). При положительной реакции в исследуемой системе происходит связывание комплемента, и тогда при добавлении сенсибилизированных антителами эритроцитов гемолиза не наблюдается. Реакцию применяют для серодиагностики сифилиса (реакция Вассермана), вирусных и бактериальных инфекций.

Иммунное прилипание. Эритроциты, тромбоциты и другие клетки крови имеют на поверхности рецепторы к третьему компоненту комплемента (СЗ). Если к антигену (бактериям, вирусам и др.) добавить соответствующую иммунную сыворотку и комплемент, то образуется комплекс антиген — антитело, покрытый СЗ-компонентом комплемента. Эту реакцию применяют при изучении ряда вирусных инфекций (клещевого энцефалита, денге), которые сопровождаются иммунопатологическими процессами и циркуляцией в крови вирусных антигенов в комплексе с антителами.

Реакция нейтрализации основана на способности антител нейтрализовать некоторые специфические функции макромолекулярных или растворимых антигенов, например активность ферментов, токсины бактерий, болезнетворность вирусов. В бактериологии эту реакцию используют для обнаружения антистрептолизинов, антистрептокиназы и антистафилолизинов. Реакцию нейтрализации токсинов можно оценивать по биологическому эффекту, так, например, титруют антистолбнячные и антиботулинические сыворотки. Смесь токсина с антисывороткой, введенная животным, не вызывает их гибели. Различные варианты реакции нейтрализации применяют в вирусологии. При смешивании вирусов с соответствующей антисывороткой и введении этой смеси животным или в клеточные культуры патогенность вирусов нейтрализуется и при этом животные не заболевают, а клетки культур не подвергаются деструкции.

Реакции с использованием химических и физических меток

Иммунофлюоресценция заключается в использовании меченных флюорохромом антител, точнее, иммуноглобулиновой фракции антител lgG. Меченное флюорохромом антитело образует с антигеном комплекс антиген — антитело, который становится доступным наблюдению под микроскопом в УФ-лучах, возбуждающих свечение флюорохрома. Реакцию прямой иммунофлюоресценции используют для изучения клеточных антигенов, выявления вируса в зараженных клетках и обнаружения бактерий и риккетсий в мазках. На обнаружении антигенов вирусов в клетках отпечатков со слизистой оболочки носа основана экспресс-диагностика гриппа, парагриппа и аденовирусной инфекции.

Более широко применяют метод непрямой иммунофлюоресценции. основанный на выявлении комплекса антиген — антитело с помощью люминесцирующей иммунной сыворотки против lgG-антител и используемой для обнаружения не только антигенов, но и титрования антител. Метод нашел применение в серодиагностике герпеса, цитомегалии, лихорадки Ласса. Препараты с наслоенной исследуемой сывороткой крови помещают в термостат при t° 37° для образования иммунных комплексов, а затем после отмывания несвязавшихся реагентов выявляют эти комплексы меченой люминесцирующей сывороткой против глобулинов человека. Применяя меченые иммунные сыворотки против lgM- или lgG-антител, можно дифференцировать тип антител и обнаруживать ранний иммунный ответ по наличию lgM-антител.

Иммунологические методы исследования основаны на специфическом взаимодействии антигенов и антител. Широко используются для определения групп крови, лабораторной диагностики инфекционных и паразитарных заболеваний, тканевых и опухолевых антигенов, видовой принадлежности белка, распознавания аллергии и аутоиммунных болезней, беременности, гормональных нарушений, в научно-исследовательской работе. Они включают серологические исследования (реакции прямого воздействия антигенов и антител сыворотки крови).

— система АВ0, включающая антигены А, В;

— система Резус, включающая антиген Резус-принадлежности класса D и антигены эритроцитов С, с, Е, е;

— система Келл, включающая антигены эритроцитов класса К.

Исследование образцов донорской крови для определения групп крови по системам АВ0, Резус-принадлежности, определения фенотипа антигенов эритроцитов по системам Резус и Келл, скрининга антиэритроцитарных аллоантител.

Иммунологические методы: метод агглютинации, основанный на слипании и выпадении в осадок частиц (агглютинатов), корпускулярного антигена под воздействием антител (агглютининов) — для определения групп крови по системам АВ0, Резус-принадлежности и фенотипа антигенов эритроцитов по системам Резус и Келл; метод гемагглютинации, основанный на способности эритроцитов с адсорбированными антигенами или антителами агглютинироваться в присутствии гомологичных сывороток или соответствующих антигенов с образованием гемагглютинатов (определение Резус-принадлежности, фенотипа антигенов эритроцитов по системам Резус и Келл, скрининга антиэритроцитарных аллоантител).

Метод преципитации, основанный на взаимодействии эквивалентных количеств мелкодисперсных растворимых антигенов (преципитиногенов) с соответствующими антителами (преципитинами) с образованием комплекса антиген-антитело (преципитата) и последующим выпадением данного комплекса в осадок, — используется для выявления неспецифических антител к кардиолипиновому антигену при диагностике сифилиса;

антитела к эритроцитарным антигенам

гемолитическая болезнь новорожденных

серологические реакции

Гелевая технология :

  • Вы здесь:  
  • Главная
  • Забор анализов
  • Серологические и иммунологические исследования

Серологические исследования

Наименование Цена
Антитела к коронавирусу SARS-CoV-2 IgM 850 Р
Антитела к коронавирусу SARS-CoV-2 IgG (п/кол) к S-белку 850 Р
АТ и АГ к ВИЧ (скрининг) 420 Р
Сифилис с кардиолипиновым и трепонемным антигенами (кровь) 350 Р
Гепатит В (Hbs — антигена) (кровь) 350 Р
Гепатит С (HCV -антитела) (с подтверждающим тестом, спектр антител) 520 Р
ВПГ IgG I+II типов 580 Р
ВПГ IgM (I+II типов) 580 Р
ВПГ IgG I типа 580 Р
ВПГ IgG II типа 580 Р
ВПГ IgG авидность 700 Р
ВЭБ IgM к капсидному белку 570 Р
ВЭБ IgG к ядерному антигену 570 Р
ВЭБ IgG к ранним белкам 630 Р
ВЭБ IgG к капсидному белку 610 Р
ВВЗ IgG к гликопротеину Е 750 Р
ВВЗ IgM 770 Р
ВВЗ IgG 700 Р
ЦМВ IgM 590 Р
ЦМВ IgG 470 Р
ЦМВ IgG авидность 930 Р
ГВЧ-6 типа IgG 650 Р
Токсоплазма IgM 600 Р
Токсоплазма IgG 490 Р
Токсоплазма IgM, IgG 1 030 Р
Токсоплазма (IgG) авидность (п/кол) 870 Р
Краснуха IgM 600 Р
Краснуха IgG 470 Р
Краснуха IgM, IgG 1 030 Р
Краснуха (IgM) авидность (п/кол) 810 Р
Корь IgG 670 Р
Корь IgM 670 Р
Хламидия trachomatis IgA 630 Р
Хламидия trachomatis IgM 550 Р
Хламидия trachomatis IgG 630 Р
Хламидия пневмония IgA 570 Р
Хламидия пневмония IgG 550 Р
Хламидия пневмония IgM 530 Р
Микоплазма пневмония IgА 510 Р
Микоплазма пневмония IgG 510 Р
Микоплазма пневмония IgМ 510 Р
Микоплазма хоминис IgA 590 Р
Микоплазма хоминис IgG 470 Р
Трихомониаз IgG 590 Р
Уреаплазма уреалитикум IgA 560 Р
Уреаплазма уреалитикум IgG 560 Р
Гепатит А Anti-HAV сум АТ (кол) 600 Р
Гепатит А, anti — HAV IgМ (п/кол) 750 Р
Гепатит А anti — HAV Ig M (п/кол) 750 Р
Гепатит А, anti-HAV IgG (п/кол) 750 Р
Гепатит В (Hbs — антитела) 600 Р
Гепатит В (IgM-антител к HBcor-антигену) 600 Р
Гепатит В (anti-HВcor сум.) 600 Р
Гепатит В (HBe-антител) 600 Р
Гепатит В (HBe-антигена) 600 Р
Гепатит С, anti-HСV IgG сумм. кач. 470 Р
Гепатит С, anti-HСV IgМ (п/кол) 470 Р
Гепатит С, anti-HСV IgG авидность (п/кол) 1 100 Р
Гепатит D anti-HDV cor IgM 570 Р
Гепатит D anti-HDV Сум. 570 Р
Гепатит Е аnti-HEV-IgM 710 Р
Гепатит Е аnti-HEV-IgG 710 Р
Комплексная диагностика гельминтозов IgG (Токсокароз, Описторхоз, Трихинеллез, Эхиноккоз) 1 000 Р
Токсокароз IgG 450 Р
Описторхоз IgG 730 Р
Трихинеллез IgG 450 Р
Эхинококкоз IgG 730 Р
Аскаридоз IgG 810 Р
Лямблиоз (суммарные антитела) 550 Р
Хеликобактер пилори IgA 730 Р
Хеликобактер пилори IgG 500 Р
Хеликобактер пилори IgM 730 Р
Иерсинеоз IgA 590 Р
Иерсинеоз IgG 590 Р
Иерсиния псевдотуберкулеза (РПГА) 430 Р
Иерсиния энтероколитика, серотип О3 (РПГА) 430 Р
Иерсиния энтероколитика, серотип О9 (РПГА) 430 Р
Сальмонеллез гр. А, В, С, Д, Е (сумм. п/кол.) 750 Р
Аденовирус IgM (кол) 650 Р
Аденовирус IgG 610 Р
Аденовирус IgА 610 Р
Амебиаз IgG 730 Р
Аспертеллез IgG 560 Р
Бордетелла пертуссис IgG 710 Р
Бордетелла пертуссис IgА 710 Р
Боррелиоз IgG 650 Р
Боррелиоз IgM 650 Р
Бруцеллез IgG (кач.) 450 Р
Бруцеллез IgМ (кач) 450 Р
Брюшной тиф (кач) 490 Р
Брюшной тиф (РПГА) 650 Р
Кандида альбиканс IgG 630 Р
Лейшманиоз IgG (п/кол) 790 Р
Микобактерии туберкулеза (сумм. АТ) 1 390 Р
Паротит IgG 650 Р
Паротит IgМ 650 Р
Респираторный синцитиальный вирус IgG 650 Р
Респираторный синцитиальный вирус IgМ 650 Р
Сыпной тиф 490 Р
Шигелла Флекснера 6 (РПГА) 450 Р
Шигелла Флекснера 1-5 (РПГА) 450 Р
Шигелла Зонне (РПГА) 450 Р

24.03.2020 24.03.2020 Подготовил Александр Колесников

Исследователи разработали методику детекции антител к коронавирусу SARS-CoV-2, показали ее высокую специфичность и обсудили возможные области применения, от ретроспективной диагностики COVID-19 для создания терапевтических препаратов на основе моноклональных антител.

Credit: peterschreiber.media | Shutterstock.com Подготовил Александр Колесников

Международный коллектив авторов опубликовал на сервере препринтов medRxiv работу, в которой описал метод детекции антител к SARS-CoV-2 с помощью иммуноферментного анализа.

Для получения антител авторы сконструировали два варианта вирусного белка S (spike, «шип»), распознающего рецептор ACE2 на поверхности клеток человека. Первый вариант — полноразмерный трехсубъединичный белок S, модифицированный для большей стабильности и удобства очистки, а второй — его фрагмент, формирующий с ACE2 непосредственный контакт: рецептор-связывающий домен RBD.

Полученные белки параллельно продуцировали в клетках млекопитающих и насекомых и изучали их способность связываться с вирус-специфическими антителами, полученными из сывороток трех пациентов с различной (от 2 до 20 дней) продолжительностью клинической инфекции. Все пациенты продуцировали антитела классов IgM, IgA и IgG, демонстрируя классический иммунный ответ к белковым антигенам, включающим иммунитет на слизистых оболочках. Вместе с тем, характер распределения подклассов IgG отличался от спектра IgG при гриппозной инфекции: при SARS-CoV2 доминировали IgG3, тогда как при гриппе наибольшие титры характерны для IgG1. Полноразмерные антигены закономерно обуславливали более высокий уровень сигнала благодаря наличию большего числа эпитопов.

Для валидации метода авторы исследовали иммунореактивность своих антигенов на образцах сыворотки, собранных в США до начала эпидемии COVID-19 и как содержавших, так и не содержавших антитела к другим вирусам. Во всех случаях, включая сыворотки, полученные от инфицированного достаточно близкородственным коронавирусом NL63, результат был отрицательным, что говорит о высокой специфичности тестирования.

Для чего нужно серологическое исследование образцов при COVID-19? Методы быстрой диагностики инфекционных агентов в настоящее время практически целиком базируются на ПЦР. Это высокоскоростной (2-5 часов) и высокочувствительный метод: в хорошо отработанном диагностическом наборе чувствительность может достигать нескольких молекул на образец, а новые методики, например, капельная цифровая ПЦР, позволяют обнаруживать и одну молекулу. Большинство тест-систем для детекции нового коронавируса — а их создано уже немало, списки см., например, здесь и здесь — основаны на ПЦР (как вариант, на изотермической амплификации нуклеиновых кислот).

Методом ПЦР можно идентифицировать, однако, только патоген в активной фазе инфекции. У переболевших вирусные нуклеиновые кислоты обнаружить невозможно: иммунная система уже очистила организм от вируса. Вместе с тем диагностика ранее инфицированных имеет огромное значение: у части заразившихся инфекции протекают в стертой или бессимптомной форме. Насколько велика доля таких людей среди всех инфицированных, остается неизвестным до тех пор, пока не становится доступен ретроградный анализ. При этом бессимптомные инфицированные могут быть столь же заразными, сколь и пациенты с выраженной симптоматикой. Отсутствие данных о бессимптомных случаях осложняет эпидемическую ситуацию, искажает картину распространения вируса и данные о смертности от инфекции.

Наиболее эффективный инструмент ретроанализа инфекции — определение антител в крови пациента. Вирус-специфические антитела циркулируют в организме спустя месяцы после элиминации патогена. (Процесс индукции значительных титров антител к патогену принято называть сероконверсией.)

Таким образом, серологические тесты на SARS-CoV-2 (как, например, разработка британской компании Biopanda) дополняют тест-системы на основе ПЦР. Изучение антител к SARS-CoV-2 не только позволит выявить переболевших в скрытой форме или ответить на вопрос, насколько эффективен иммунный ответ к вирусу. Не исключено использование теста для выявления гипериммунных выздоровевших с целью использования  антител из донорской крови, нейтрализующих вирус.Авторы напоминают об успешном использовании в Китае для лечения инфицированных SARS-CoV-2 сыворотки выздоровевших пациентов (см. об этом на PCR.news). При этом высоки риски побочных эффектов и инфекции другими вирусами, такими как ВИЧ, гепатит С, вирус Эпштейна — Барр и цитомегаловирус, однако при критическом сосстоянии пациентов и в отсутствии альтернативы метод все еще применяется. 

Кроме того, при испытаниях прототипа вакцины детекция антител позволяет оценить его эффективность. Фрагмент белка оболочки вируса, связывающий ACE2, может быть использован в качестве аффинной ловушки для получения B-лимфоцитов, потенциально вырабатывающих моноклональные антитела против вируса; это путь к созданию препаратов, блокирующих инфекцию SARS-CoV2. 

Источник

Fatima Amanat, et al. // A serological assay to detect SARS-CoV-2 seroconversion in humans. // MedRxiv, Posted March 18, 2020. DOI: 10.1101/2020.03.17.20037713

Добавить в избранное Подписаться

Лабораторно-диагностический центр в Тольятти

  • Центральный район

    ул. Октябрьская, д. 55а Пн-Пт с 08:00 до 19:00 Сб, Вс выходные дни

  • Автозаводский район

    ул. 40 лет Победы, д. 100 Пн-Пт с 08:00 до 16:30 Сб, Вс выходные дни

Услуги и цены Серологические исследования

На сегодняшний день для выявления самых разнообразных инфекционных заболеваний в организме человека современная медицина активно применяет метод серологического исследования биологического материала.

Как проводится серологическое исследование?

Кому назначают серологическую диагностику?

Возможности серологической диагностики

При всей ценности результатов серологии важно помнить, что данный метод диагностики имеет только второстепенную значимость и не может выступать в качестве неоспоримых доказательств наличия того или иного заражения организма. То есть серологический анализ делается только с целью подтверждения предполагаемого диагноза и только при наличии соответствующей клинической картины.

Если вам назначили такое исследование, то предлагаем воспользоваться услугами нашего диагностического цента в Тольятти! Наши опытные лаборанты правильно проведут забор биологического материала, но предоставят вам гарантированную точность результатов проведенной диагностики.

Все группы исследований

Задать вопрос:

[contact-form-7 404 «Not Found»]

Если вы заподозрили у себя признаки COVID-19, пугаться точно не стоит! Прежде, чем бежать сдавать анализы на коронавирус можно сделать предварительную лабораторную диагностику и увидеть результаты уже в течение суток на электронной почте.

Какие анализы можно сдавать?

[02-029] Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ

Стоимость 410 р. (без забора крови)

Клинический анализ крови – довольно серьезное исследование, которое позволяет узнать, есть ли у вас анемия, заподозрить или исключить онкологию и т.д. Можно сказать, что анализ продемонстрирует основные показатели вашего здоровья.

Кровь всегда реагирует на инфекцию. В зависимости от показателей можно определить, бактериальная или вирусная инфекция имеет место. Кроме того, клинический анализ крови покажет состояние Вашего иммунитета.  

Особенности: обязательно сдавать натощак (не принимать пищу в течение 8 часов перед исследованием), потому что возможно повышение количества лейкоцитов после приема пищи. В этом случае могут быть сложности с диагностикой.image

Смотрим результаты:

При бактериальной инфекции

  • Повышены: лейкоциты, палочкоядерные лейкоциты, нейтрофилы, СОЭ;
  • Снижены: лимфоциты.

При вирусной инфекции

  • Повышены: лимфоциты, моноциты;
  • Снижены: нейтрофилы;
  • Лейкоциты: в норме или чуть ниже нормы;
  • СОЭ: в норме или незначительно повышена.

Важно! Тем не менее, это всего лишь закономерности. Широко известны случаи, когда кровь реагирует на инфекцию совершенно иным от привычного способом. В связи с этим, любой человек, не имеющий медицинского образования, может прийти к ошибочным выводам. Это значит, что интерпретацией результатов исследований и постановкой правильного диагноза должен заниматься исключительно врач.

Лучше всего показать результаты терапевту, который выработает тактику лечения

Что делать, если…

Вас не волнуют расширенные показатели клинического анализа крови? Вы хотите просто узнать, стоит ли переживать по поводу COVID-19, есть ли у вас вирусная инфекция и т.д.

В этом случае, можно даже сэкономить и сдать анализ >>

[02-025] — Лейкоцитарная формула

Стоимость 210 руб. (без забора крови)

Особенности: такие же, как при клиническом анализе. Обязательно сдавать натощак (не принимать пищу за 2-3 часа до исследования), чтобы получить корректное количество лейкоцитов.

Существует пять видов лейкоцитов (лимфоциты, нейтрофилы, моноциты, эозинофилы, базофилы), каждый из них выполняет определенную функцию. «Взаимоотношения» между лейкоцитами могут показывать и воспалительные процессы, и аллергическую реакцию.

Коварный COVID-19 можно заподозрить по нехарактерно низкому уровню лейкоцитов! В крови взрослого человека лейкоцитов содержится в среднем 4-9х10 9/л. Превышение или снижение стандартных показателей– серьезный повод для тревоги.

Важно! Читать лейкоцитарную формулу нужно очень тщательно и все равно нет гарантии, что вы получите однозначный ответ. Интерпретацией результатов исследований и постановкой правильного диагноза должен заниматься исключительно врач.

Не забудьте показать результаты терапевту!

Сдать кровь (и другие биоматериалы) на все исследования, предлагаемые лабораторной службой «Хеликс», Вы можете в Медицинском центре «Мира» ежедневно:

  • с 7.30 — пн-пт
  • с 8.00 — сб
  • с 9.00 — вс

Рекомендуем накануне сдачи уточнить правила подготовки к лабораторным исследованиям в единой справочной Лабораторной службы «Хеликс» по тел. 8 800 700 03 03 или у администраторов Медицинского центра «Мира» по тел. 224-20-56, 286-20-56.

Оцените статью
Рейтинг автора
4,8
Материал подготовила
Татьяна Лапшаева
Нефролог, врач высшей категории, стаж более 20 лет
А как считаете Вы?
Напишите в комментариях, что вы думаете – согласны
ли со статьей или есть что добавить?
Добавить комментарий