Диагностика системной красной волчанки в Профессорской клинике

image

Периферическая кровь или цельная кровь содержит различные клетки крови, такие как эритроциты (красные кровяные клетки), лейкоциты (белые кровяные клетки) и тромбоциты, взвешенные в плазме крови. Плазма состоит в основном из воды, но также содержит белки, глюкозу, ионы, гормоны и факторы свертывания крови. Удаление факторов свертывания из плазмы приводит к образованию сыворотки крови.

Наиболее распространенными клетками в крови являются эритроциты, в состав которых входит гемоглобин, железосодержащий белок. Гемоглобин обратимо связывает кислород и тем самым облегчает его транспортировку по организму.

Тромбоциты играют важную роль в восстановлении ран, так как они останавливают кровотечение путем слипания и свертывания крови в сосудах. Тромбоциты млекопитающих не имеют ядра. Они состоят из участков цитоплазмы, которые получают из мегакариоцитов в костном мозге до поступления в кровообращение. Примерно 25-40% тромбоцитов находятся в селезенке и высвобождаются по мере необходимости, а остальные свободно циркулируют в крови около десяти дней.

Наконец, различные подтипы лейкоцитов играют существенную роль в иммунном ответе.

Все клеточные компоненты крови происходят из гемопоэтических стволовых клеток (ГСК). Эти плюрипотентные клетки располагаются в костном мозге и дают начало специализированным клеткам-предшественникам с более ограниченным потенциалом: лимфоидным клеткам-предшественникам и миелоидным клеткам-предшественникам. В свою очередь лимфоидные клетки-предшественники дают начало Т-и В-лимфоцитам, а также и естественным киллерам (NK-клеткам), тогда как миелоидные клетки-предшественники дают начало моноцитам, дендритным клеткам и гранулоцитам (включая нейтрофилы, базофилы и эозинофилы). Наконец, эритроциты и тромбоцит-продуцирующие мегакариоциты, происходят от их общего предшественника.

Оглавление

1 Лейкоциты

Лейкоциты играют ключевую роль в иммунном ответе и поэтому представляют особый интерес для понимания механизмов баланса здоровья и болезни. Для проведения исследований часто требуется проводить выделение лейкоцитов из крови или ее продуктов. Классификация лейкоцитов может быть основана на их происхождении (миелоидные или лимфоидные) или на морфологии их ядра (мононуклеарные или полинуклеарные) и наличии или отсутствии гранул в их цитоплазме, что разделяет лейкоциты на две группы: 1) мононуклеарные клетки периферической крови (PBMCs, также известные как агранулоциты) и 2) полиморфноядерные лейкоциты (PMNs, также известные как гранулоциты).

1.1 Мононуклеарные клетки периферической крови (PBMCs)

PBMCs включают лимфоциты (Т, В и NK-клетки), моноциты и дендритные клетки. Т-и В-лимфоциты отличаются местом своего созревания и антигенными рецепторами. Т-клетки созревают в тимусе и экспрессируют Т-клеточный рецептор TCR, тогда как В-клетки созревают в костном мозге и несут В-клеточный рецептор BCR.

Тип клеток

% от PBMCs   Маркеры

Функция

CD4+ T клетки 25–60% CD3+CD4+ Координируют адаптивный иммунитет через активацию и регуляцию других иммунных клеток
CD8+ T клетки 5–30% CD3+CD8+ Уничтожают раковые клетки, инфицированные или поврежденные клетки
B клетки 5–10% CD19+ Секретируют антитела как часть гуморального иммунного ответа
NK клетки 10–30% CD56CD3 Вызвают лизис или апоптоз инфицированных клеток
Моноциты 5–10% CD14+ Захватывают чужеродные объекты посредством фагоцитоза, выполняют презентацию антигена и продуцируют цитокины
Дендритные клетки 1–2% Процессинг и презентация антигенного материала Т-клеткам

image

1.2 Гранулоциты

Гранулоциты характеризуются наличием гранул в их цитоплазме и переменной формой ядра; отсюда и название — полиморфноядерные лейкоциты (PNMs). Нейтрофилы, эозинофилы и базофилы — это все гранулоциты, которые при активации высвобождают содержимое своих гранул. Нейтрофилы являются наиболее распространенными лейкоцитами крови и первыми реагируют на очаг воспаления, где они выполняют свою фагоцитарную функцию. Считается, что эозинофилы (также известные как ацидофилы) участвуют в нападении на многоклеточных паразитов, таких как черви. Базофилы связаны со многими специфическими воспалительными реакциями, особенно теми, которые вызывают аллергические симптомы. Базофилы содержат антикоагулянт гепарин, который препятствует слишком быстрому свертыванию крови, а также сосудорасширяющий гистамин, который способствует притоку крови к тканям.

2 Содержание лейкоцитов в крови и в продуктах крови

Наиболее часто используемый источник лейкоцитов-периферическая цельная кровь. Однако в качестве источников все чаще используются продукты крови, такие как лейкоцитарно-тромбоцитарный концентрат (Buffy Coat), лейкоциты из камеры системы удаления лейкоцитов (LRSC) и материал для лейкафереза, такой как Лейкопак (Leukopak®). Для некоторых направлений, например, исследования стволовых клеток, пуповинная кровь и костный мозг лучше подходят в качестве исходного материала. Количество и состав клеток различаются между кровью и различными продуктами крови. Поскольку к каждому прикладному или исследовательскому вопросу предъявляются особые требования в отношении количества и состава клеток, источник лейкоцитов должен быть выбран соответствующим образом.

Типы клеток, абсолютное количество, и встречаемость в цельной крови и ее продуктах

Цельная кровь Buffy coat LRSC Лейкопак®
Эритроциты Абсолютное кол-во  5×109  cells/mL 4×1011 cells/buffy coat 5×1010 cells/LRSC 8×109 cells/половина Лейкопак®
По отношению к PBMCs 2500 400 50 1.2
PBMCs Абсолютное кол-во 2×106 cells/mL 1×109 cells/buffy coat 1×109 cells/LRSC  7×109 cells/половина Лейкопак®
По отношению к PBMCs 1 1 1 1
Лейкоциты Абсолютное кол-во 5×106 cells/mL  2×109 cells/buffy coat 1×109 cells/LRSC 7×109 cells/половина Лейкопак®
По отношению к PBMCs 2.5 2 1 1

Средние частоты общего количества лейкоцитов в различных продуктах крови.

Цельная кровь Buffy coat LRSC Лейкопак®
Общие T клетки 22.5±3.8% 53.8±6.1% 53.8±6.1% 54.5±12.4%
CD4+ T клетки 14.6±3.5% 24.4±6.6% 32.4±6.6% 31.9±6.4%
CD8+ T клетки 6.8±1.3% 10.8±4.6% 15.0±4.5% 17.1±8.1%
B клетки 5.2±2.3% 7.2±2.4% 11.3±3.3% 12.5±4.6%
Моноциты 8.4±1.3% 10.7±2.8% 20.3±5.7% 19.1±7.1%
NK клетки 4.4±2.4% 4.1±2.4% 10.2±4.0% 7.7±3.0%
CD3+CD56клетки 0.8±0.7% 1.4±2.1% 1.8±1.3% 4.3±7.1%
Эозинофилы 3.2±1.6% 1.3±0.8% 1.9±2.3% 1.1±0.9%
Нейтрофилы 53.8±6.1% 34.4±11.4% 2.9±1.7% 3.9±3.4%

Частоты (% популяции) клеток определяли методом проточной цитометрии с использованием 7-цветного набора для Иммунофенотипирования клеток человека; количество лейкоцитов и эритроцитов определяли на Sysmex ® XP-300. Цифры указывают на проценты ± стандартное отклонение (n ≥ 10).

2.1 Цельная кровь

Все основные популяции иммунных клеток можно обнаружить в наиболее естественном состоянии в свежеприготовленной периферической крови. Однако типичный образец цельной крови редко превышает 10 мл и часто может быть меньше, особенно если донором является ребенок. Большие объемы могут быть получены от здоровых доноров, но обычно на одно донорство берется не более 500 мл. Это значительно ограничивает частоту встречаемости редких клеток, которые могут быть выделены из цельной крови. Преимуществом цельной крови, как источника, является свежесть материала, что очень важно для работы с чувствительными клеточными популяциями, такими как, например, нейтрофилы.

Антикоагулянты обычно добавляются к крови для предотвращения свертывания. Гепарин, этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА) и цитрат являются одними из наиболее часто используемых добавок. Гепарин связывается с ингибитором фермента антитромбином III (АТ), что приводит к конформационным изменениям внутри белка АТ и в конечном счете к его активации. Активированный АТ инактивирует тромбин, фактор Ха и другие протеазы, участвующие в свертывании крови. ЭДТА сильно и необратимо хелатирует двухвалентные катионы, такие как Са2+, тем самым предотвращая свертывание крови. Наконец, цитрат также используется для связывания Ca2+.

2.2 Лейкоцитарно-тромбоцитарный концентрат (Buffy coat)

Лейкоцитарно-тромбоцитарный концентрат или Buffy coat -это фракция образца крови, содержащая лейкоциты после удаления эритроцитов и плазмы. После донорства мешок с 450-мл крови центрифугируют, в результате чего получают три фракции: I) плазму (верхняя фракция), ii) Buffy coat (промежуточная фракция) и ii) эритроциты (нижняя фракция). Как правило, банки крови интересуются только плазмой и эритроцитами. Поэтому эти части извлекаются из кровяного мешка. Оставшийся материал – это и есть Buffy coat, состоящий из концентрированных лейкоцитов и тромбоцитов с уменьшенным количеством эритроцитов и гранулоцитов, объем которого колеблется в диапазоне от 30 до 80 мл. Легкодоступный лейкоцитарно-тромбоцитарный концентрат является популярным источником PBMCs для исследований.

2.3 Лейкоциты из камеры системы удаления лейкоцитов (LRSC)

LRSC, также известный как buffy cone, является побочной фракцией клеток в процессе тромбоцитарного фереза, при котором тромбоциты отделяются и собираются из взятой крови для последующего переливания пациентам с нарушениями, связанными с тромбоцитами. Отделенная фракция тромбоцитов все еще содержит лейкоциты, которые должны быть удалены до переливания тромбоцитов, чтобы предотвратить проблемы с отторжением. С этой целью лейкоциты отфильтровываются лейкоредукцией и собираются в специальной камере — LRSC. Таким образом, LRSC содержит высокую плотность лейкоцитов с низкой концентрацией нейтрофилов.

2.4 Leukopak®

Хорошим источником большого количества лейкоцитов являются коммерчески доступные Лейкопаки®. Это обогащенный продукт лейкафереза, собранный из периферической крови и состоящий из различных клеток крови, включая моноциты, лимфоциты и эритроциты. Соотношение лейкоцитов и эритроцитов низкое (в среднем 1:1), как и количество гранулоцитов. Коммерческие Лейкопаки® выпускаются в нескольких стандартных размерах, начиная от целого Лейкопака® до размеров ½ и ¼. Хотя количество PBMCs в Лейкопаке® является переменным, оно обычно остается в определенном диапазоне.

В некоторых случаях донорам вводят G-CSF (гранулоцитарный колониестимулирующий фактор), чтобы индуцировать выработку лейкоцитов и вызвать миграцию стволовых клеток из костного мозга в кровь. Таким образом, мобилизованные Лейкопаки® имеют более высокое количество лейкоцитов по сравнению с иммобилизованными Лейкопаками®, и частоты различных подтипов PBMC также различаются. Большинство Лейкопаков® получают от здоровых доноров, но также можно запросить Лейкопакс® для некоторых заболеваний, таких как аллергия и диабет.

3 Пуповинная кровь как источник лейкоцитов

Пуповинная кровь остается в плаценте и пуповине после рождения и собирается для сохранения стволовых клеток, которые могут быть использованы при лечении гемопоэтических и генетических нарушений. Пуповинная кровь содержит все компоненты цельной крови, включая лейкоциты, а также богата CD34+ гемопоэтическими стволовыми клетками. Несмотря на то, что количество CD34+ клеток сильно варьируется от донора к донору, обычно можно собрать от 1 до 4 миллионов CD34+ клеток с одной пуповины. Пуповинная кровь все чаще используется на экспериментальной основе в качестве альтернативного источника стволовых клеток, которые в противном случае получают из костного мозга.

4 Костный мозг как ресурс лейкоцитов

Костный мозг (КМ) – это полутвердая ткань, расположенная в губчатых частях костей и являющаяся основным местом кроветворения. Помимо костномозговой жировой ткани и поддерживающих стромальных клеток, КМ содержит мезенхимальные (МСК) и гемопоэтические стволовые клетки (ГСК). ГСК дают начало различным клеткам крови, включая лейкоциты. МСК дифференцируются в клетки скелетных тканей, включая клетки хрящей (хондроциты), костные клетки (остеобласты) и жировые клетки (адипоциты). Мононуклеарные клетки КМ, которые включают лейкоциты, а также стволовые и прогениторные клетки, можно отделить от эритроцитов и гранулоцитов путем центрифугирования в градиенте плотности.

Скачать PDF: Isolation of mononuclear cells from human bone marrow aspirates by density gradient centrifugation (special protocol)

5 Пробоподготовка крови

Для выделения клеток-мишеней можно использовать непосредственно цельную кровь. Однако в некоторых случаях использование именно фракции PBMC в качестве стартового материала для выделения определенного типа клеток может быть более эффективным.  PBMCs могут быть получены из цельной крови путем центрифугирования в градиенте плотности или путем лизиса эритроцитов, хотя последний способ считается “быстрым и грязным” методом.

В наиболее распространенном методе центрифугирования, с использованием градиента плотности используется раствор высокомолекулярных полимеров сахарозы Ficoll Paque® (Фиколл). Образец крови центрифугируют в пробирке, содержащей фиколл, чтобы разделить его компоненты в соответствии с их плотностями. Эритроциты имеют более высокую плотность, чем плазма, и поэтому оседают в нижней части пробирки и могут составлять до 45% от общего объема (в крови от здоровых доноров). Этот процент объема известен как гематокрит. Лейкоциты и тромбоциты образуют узкий слой с кольцом непосредственно над эритроцитами. Как уже упоминалось ранее, этот слой называется Buffy coat или лейкоцитарно-тромбоцитарный слой.  Наконец, плазма составляет чуть менее 55% от общего объема и представляет собой бледно-желтую жидкость. Лейкоцитарно-тромбоцитарный слой содержит лимфоциты, моноциты и тромбоциты. Этот слой аккуратно собирается центрифугируется дважды в буферном солевом растворе, чтобы промыть PBMCs от градиента плотности и удалить тромбоциты. Полученные PBMCs могут быть использованы для дальнейшего выделения клеточных субпопуляций или других экспериментов.

Скачать PDF: Isolation of mononuclear cells from human peripheral blood by density gradient centrifugation (special protocol)

snc1571571 18.07.2020 Комментариев нет Категории: Справочник по технологиям Поделиться

Гематологические исследования Биохимические исследования Гормональные исследования Иммунологические исследования Исследование мочи Исследование кала Исследование спермы Цитологические исследования Гистологические исследования Диагностика патологии печени без биопсии: ФиброМакс, ФиброТест, СтеатоСкрин Дисбиотические состояния кишечника и влагалища (ИНБИОФЛОР, Фемофлор, микробиоценоз урогенитального тракта) Диагностика инфекционных заболеваний Цитогенетические исследования Генетические предрасположенности Наследственные моногенные заболевания и состояния Наследственные болезни обмена веществ у новорождённых: скрининг «Пяточка» Определение биологического родства: отцовства и материнства

Лейкоцитарная формула (дифференцированный подсчет лейкоцитов, лейкоцитограмма, Differential White Blood Cell Count) с микроскопией мазка крови при наличии патологических сдвигов

Описание—>

LE-клетки или клетки красной волчанки представляют собой нейтрофилы, которые содержат в себе ядра погибших клеток, прошедшие фагоцитоз, с прикрепившимися к ним антиядерными антителами.

Подготовка

Перед сдачей крови на анализ нельзя принимать пищу в течение минимум 12 часов. В течение пары дней требуется воздержаться от приема алкогольных напитков и курения. Биоматериал для исследования сдают утром, примерно в 8-9 часов утра, непосредственно перед анализом запрещаются любые физические нагрузки.

Примечания

Наличие LE-клеток в крови свидетельствует о развитии системной красной волчанки либо аутоиммунных нарушений. Вероятность обнаружить клетки красной волчанки составляет порядка 70-80%. Содержание LE-клеток в крови сигнализирует о начальных этапах развития волчанки или об очередном усугублении состояния, если болезнь уже была выявлена ранее. При наступлении прогресса в лечении концентрация LE-клеток постепенно снижается, также они могут пропасть совсем.

Латинское название

Lupus Erythematosus cells.

Существует большое количество вариантов сдачи анализа крови. Кровь берется с разными целями, для получения показателей уровня различных элементов в крови, а также других связанных с ними процессов. Точный анализ крови поможет вовремя установить, что не так в организме и подскажет врачу, какие меры необходимо принять для улучшения вашего состояния. Анализ крови также помогает контролировать процесс воздействия медикаментов на организм. Рассмотрим, как расшифровываются показатели: Лейкоцитарные показатели:

  • WBC (лейкоциты) — белые или бесцветные клетки крови различных размеров. Основная функция лейкоцитов — противодействовать инфекциям, вирусам, бактериям и т.д. Лейкоциты делятся на 5 типов: нейтрофилы, лимфоциты, моноциты, эозинофилы и базофилы.
  • LYM (лимфоциты) — основные клетки иммунной системы человека. Лимфоциты — один из видов белых кровяных клеток, который производится в лимфатической системе и костном мозге. По своим функциям лимфоциты делятся на В — лимфоциты, вырабатывающие антитела, Т-лимфоциты, которые борются с инфекциями и NK лимфоциты, контролирующие качество клеток организма.
  • LYM% — относительное содержание лимфоцитов.
  • MON (моноциты) — один из видов фагоцитов, самый крупный вид лейкоцитов. Моноциты образуются в костном мозге. Эти клетки участвуют в регулировании и дифференцировании кроветворения, затем уходят в ткани организма и там превращаются в макрофаги. Моноциты имеют большое значение, так как отвечают за начальную активацию всей иммунной системы человека.
  • MON%  — относительное содержание моноцитов.
  • NEU (нейтрофилы) — нейтрофилы генерируются в костном мозге. Срок их службы в крови длится несколько часов. Нейтрофилы уничтожают микробы (фагоцитоз).
  • NEU% — относительное содержание нейтрофилов.
  • EOS (эозинофилы) — белые клетки крови, характеризуются специфическим оранжевым цветом. Они принимают участие в иммунной системе. Повышаются при инфекциях паразитами. Существует тенденция к появлению при аллергии и астме.
  • EOS% — относительное содержание эозинофилов.
  • BAS (базофилы) — одна из крупных форм лейкоцитов в крови, относящихся к иммунной системе. Основная функция — расширение кровеносных сосудов во время инфекции.
  • BAS% — относительное содержание базофилов. 

Эритроцитарные показатели: 

  • RBC (эритроциты) — красные кровяные тельца, переносящие гемоглобин. Главная функция эритроцитов транспортировка кислорода из лёгких ко всем тканям и двуокись углерода — от тканей обратно в лёгкие. Мало эритроцитов — мало гемоглобина. Мало гемоглобина — мало эритроцитов. Они взаимосвязаны.
  • HGB (гемоглобин) — Белок, содержащийся в эритроцитах и отвечающий за перенос молекул кислорода к клеткам организма. Уровень гемоглобина не является постоянной величиной и зависит от возраста, пола, этнической принадлежности, заболевания, курения, у женщин — от беременности и т.д.
  • HCT (гематокрит) — показывает в процентах индекс объёма эритроцитов к объёму всего образца крови.
  • MCV (средний объём эритроцита) — индекс среднего объёма эритроцитов.
  • MCH (средний объём гемоглобина) — среднее количество гемоглобина в отдельном эритроците: в красных кровяных тельцах.
  • MCHC — средняя концентрация гемоглобина в эритроците.
  • RDWc — это ширина распределения эритроцитов. Показатель определяет, как эритроциты отличаются между собой по размерам. 

Тромбоцитарные показатели:

  • PLT (тромбоциты) — клетки, влияющие на процессы свёртывания крови. Тромбоциты отвечают за гемостаз, заживление ран и остановку кровотечения. Анализ тромбоцитов важен при болезнях костного мозга, в котором они образуются.
  • PCT (тромбокрит) — показатель, характеризующий процент тромбоцитарной массы в объеме крови. Используется для оценки риска возникновения кровотечения и тромбозов.
  • MPV (средний объём тромбоцитов) — индекс среднего объёма тромбоцитов.
  • PDWc — относительная ширина распределения тромбоцитов по объёму.

Дополнительные показатели: 

  • СОЭ — скорость оседания эритроцитов. Неспецифический лабораторный показатель крови, отражающий соотношение фракций белков плазмы; изменение СОЭ может служить косвенным признаком текущего воспалительного или иного патологического процесса. 

Перейти к: навигация, поиск

ЛЕЙКОЛИЗ (греч. leukos белый + lysis разрушение, растворение, распад; син. лейкоцитолиз) — растворение, распад, разрушение лейкоцитов. Л. вызывается самыми разнообразными агентами, которые могут привести клетку к гибели.

При Л. клетка теряет свою нормальную структуру, контуры ее становятся расплывчатыми, нередко цитоплазма совсем отсутствует. При лизисе лимфоцитов сохраняются обычно полуразрушенные глыбчатые ядра с остатками ядрышек (нуклеол). Л. нейтрофилов в большинстве случаев приводит к распаду всей клетки; иногда можно видеть разрушение цитоплазмы или только части ее без резких изменений структуры ядра; в других случаях сохраняются лишь остатки ядра и зернистости. При распаде эозинофилов обнаруживаются остатки характерной зернистости, при распаде моноцитов — сетчатая структура ядра и светло-серое облако цитоплазмы. В стадии, предшествующей полному лизису, лейкоциты дистрофически изменяются. Ядра пикнотизируются либо структура их становится разреженной (расплывчатой), может наблюдаться кариорексис, вакуолизация ядра и цитоплазмы.

Разрушенные клетки выявляются в мазках крови после их приготовления. В нормальной крови встречаются единичные разрушенные в результате естественного отмирания клетки. Продолжительность жизни различных лейкоцитов в организме человека исчисляется от нескольких до 100 и более дней. Л. при некоторых заболеваниях, очевидно, связан с изменением физ.-хим. и физиол, свойств клеточных мембран. На проницаемость мембран влияют липиды, которые в виде фосфолипидов и холестерина входят в состав клеточных мембран; возможно, что проницаемость мембран определяется соотношением различных липидных компонентов.

Л. может возникнуть под влиянием токсических веществ различной природы, хим. и физ. агентов, действия ионизирующего излучения, лейкоцитолитической сыворотки и др.

Лизированные клетки обнаруживаются в крови при брюшном и сыпном тифе, при тяжелых инфекциях, орнитозах, малосимптомном инф. лимфоцитозе, остром лейкозе.

Диагностическое значение Л. приобретает при хрон, лимфолейкозе, для к-рого характерны так наз. тени Гумпрехта — разрушенные при приготовлении мазка ядра лимфоцитов с остатками нуклеол. Их число может сильно варьировать, составляя иногда половину всех лейкоцитов крови. Однако показателем тяжести болезни и прогноза лизированные клетки служить не могут.

ЛЕЙКОЛИЗ наблюдается в начальном периоде острого лучевого поражения. Хрон, лучевая болезнь сопровождается небольшим Л.

Л. возникает в случаях незавершенного фагоцитоза, когда поглощенные лейкоцитами микробы не подвергаются перевариванию, сохраняются и размножаются в клетке. Лимфадениты, вызванные банальной инфекцией, могут сопровождаться значительным Л. Реже Л. отмечается при фагоцитозе лейкоцитами гонококков. Сроки распада лейкоцитов в ряде случаев определяются циклом развития возбудителя в лейкоцитах, как, напр., при орнитозах.

Библиография: Даштаянц Г. А. и Вайсман С. Г. Лейколиз — новый лабораторный тест для определения активности ревматического процесса, Врач, дело, № 7, с. 36, 1971; Федоров И. И. и др. К методике определения лейколиз а в крови, Лаборат, дело, Ne 5, с. 268, 1971.

В. Т. Морозова.

Категория: Источник: Большая Медицинская Энциклопедия (БМЭ), под редакцией Петровского Б.В., 3-е издание

Рекомендуемые статьи

Оцените статью
Рейтинг автора
4,8
Материал подготовила
Татьяна Лапшаева
Нефролог, врач высшей категории, стаж более 20 лет
А как считаете Вы?
Напишите в комментариях, что вы думаете – согласны
ли со статьей или есть что добавить?
Добавить комментарий